丁香疫霉菌鉴定检测

检测项目

菌丝形态观察、孢子囊诱导培养、游动孢子释放监测、卵孢子形成鉴定、菌落生长速率测定、温度适应性测试、寄主专化性验证、致病性测定、羧甲基纤维素酶活性分析、β-葡萄糖苷酶活性检测、过氧化物酶同工酶电泳、酯酶同工酶谱分析、ITS序列扩增、COX1基因测序、β-tubulin基因特异性引物检测、EF1α基因多态性分析、SSR分子标记开发、LAMP快速检测体系建立、实时荧光定量PCR定量分析、免疫胶体金试纸条开发、ELISA抗体效价测定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOFMS）蛋白指纹图谱构建、细胞壁降解酶活性测定、草酸分泌量测定、抗生素敏感性试验、杀菌剂抗性基因筛查、土壤带菌量监测、病残体存活周期追踪、空气孢子捕捉计数

检测范围

紫丁香叶片病斑样本、欧洲丁香茎干溃疡组织、暴马丁香根系腐烂物、花叶丁香芽鞘渗出液、波斯丁香嫁接接口分泌物、华北丁香幼苗猝倒病株基质土壤样本组培苗培养基残留物水培营养液沉淀物温室栽培基质腐殖质层林下凋落物混合样城市绿化带灌溉水样苗圃工具表面拭子样本种子包衣剂悬浮液枝条愈伤组织切片果实褐变部位分离物花萼霉变组织菌核病株韧皮部提取液叶柄维管束显微切片花粉载体附着物昆虫介体携带物有机肥发酵产物泥炭土改良剂混合样木屑覆盖物浸出液雨水径流沉积物修剪刀具生物膜样本育苗穴盘残留基质

检测方法

• 形态学鉴定：采用胡萝卜片诱导法培养孢子囊，V8培养基观测菌丝分支特征，游动孢子释放需进行低温震荡刺激
• 分子生物学检测：设计Phytophthora属特异性引物ITS6/ITS4进行PCR扩增，结合MspI限制性内切酶进行RFLP分型
• 实时荧光定量PCR：基于Ypt1基因设计TaqMan探针，建立Ct值与菌体浓度的标准曲线
• MALDI-TOFMS：提取菌体蛋白经甲酸乙腈处理后点靶，使用BrukerMicroflex质谱仪采集2000-20000m/z谱图
• ELISA检测：包被多克隆抗体建立双抗夹心法，OD450值＞0.3判定为阳性
• 生理生化测定：采用APIZYM试剂盒进行19种酶活性半定量分析
• 杀菌剂敏感性：含药平板法测定甲霜灵EC50值

检测标准

• GB/T31785-2015植物病原菌分离与鉴定技术规范
• SN/T2587-2010植物病原卵菌检疫鉴定方法
• ISO/TS17766-2016植物疫霉属分子鉴定技术指南
• EPPOPM7/138(1)疫霉菌常规检测规程
• GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定
• NY/T1859.2-2016植物检疫性有害生物检测规程第2部分：疫霉属
• ISO16140-3:2021微生物检测方法验证通用要求
• GB/T28630.2-2012白蜡枯梢病菌检疫鉴定方法
• AOACOfficialMethod2005.08Phytophthora属免疫磁珠富集法
• BSENISO16140-4:2020分子生物学方法验证协议

检测仪器

• 倒置生物显微镜（OlympusIX73）：配备微分干涉对比装置（DIC），用于观测游动孢子鞭毛着生位置
• 梯度PCR仪（Bio-RadT100）：执行Touch-downPCR程序降低非特异性扩增

检测服务流程

确认测试对象及项目：根据要求确认测试对象并进行初步检查，安排样品寄送或上门采样;

制定与确认实验方案：制定实验方案并与委托方，确认验证方案的可行性和有效性;

签署委托书与支付：签署委托书，明确测试细节，确定测试费用并支付;

执行与监控实验测试：严格按照实验方案执行测试，记录数据，进行必要的控制和调整;

数据分析与出具报告：分析数据并进行归纳，撰写并审核测试报告，出具报告，并反馈结果给委托方。