冬生疫霉菌检疫鉴定技术检测

检测项目

菌丝形态观察、孢子囊结构分析、游动孢子活性测定、卵孢子染色鉴定、致病性试验、温度敏感性测试、寄主范围测定、抗生素抗性分析、ITS序列比对、β-tubulin基因扩增、COX1基因测序、SSR分子标记分析、实时荧光定量PCR检测、LAMP快速诊断技术、免疫层析试纸检测、ELISA抗体效价测定、脂肪酸甲酯谱分析、细胞壁多糖组分测定、代谢产物毒性试验、菌落生长速率统计、产孢量测定、pH适应性测试、碳氮源利用试验、杀菌剂敏感性评估、生物膜形成能力检测、细胞核染色计数、线粒体基因组测序、RNA干扰效率验证、蛋白质组学分析、转录组差异表达研究

检测范围

马铃薯块茎组织切片、番茄根系分泌物样本、辣椒果实病斑组织、茄子维管束分离物、烟草叶片浸出液、大豆幼苗水培液、玉米穗轴腐病样本、棉花黄萎病株残体、松树根际土壤浸提液、水稻苗床基质样本、苹果树腐烂病皮层组织、葡萄藤木质部提取物、柑橘溃疡病斑刮取物、香蕉假茎流胶液样本、茶树根腐病须根标本、橡胶树割面渗出液样本、甘蔗茎秆髓心组织切片、向日葵茎基腐病株分离物、草坪草根系共生菌群样本、温室栽培基质浸出液组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物组培苗移栽基质残留物

检测方法

形态学鉴定：采用光学显微镜观察菌丝分支角度及孢子囊着生方式，配合扫描电镜进行乳突结构三维重建。
分子生物学检测：基于多重PCR技术同步扩增ITS2和EF-1α基因片段，结合毛细管电泳进行产物分型。
生理生化分析：应用Biolog微生物鉴定系统测定95种碳源代谢图谱特征。
血清学检测：采用单克隆抗体夹心ELISA法测定菌体表面抗原特异性。
全基因组测序：使用Nanopore三代测序平台完成40覆盖度的全基因组组装。
代谢组学分析：通过UPLC-QTOF-MS技术建立次生代谢产物指纹图谱。

检测标准

GB/T36852-2018植物检疫病原真菌分离培养技术规范
SN/T5364.5-2021进出口植物病原分子检测规程疫霉属第五部分
ISO16140-3:2021微生物鉴定方法验证通用要求
EPPOPM7/76(2)疫霉属诊断标准操作程序
APHISPPQProtocol真菌类检疫性病原菌分子鉴定指南
JISK3705:2020植物病原真菌显微观察技术标准
AS5013.15-2012食品微生物学检验真菌毒素产生菌鉴定
BSENISO21527-1:2008真菌计数与鉴定通用规则
NY/T401-2020农作物种子病害检验规程
GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程病害检验

检测仪器

全自动微生物鉴定系统：集成比浊计与比色模块实现标准化接种浓度控制
数字PCR仪：采用微滴分割技术提升低浓度模板检出灵敏度
激光共聚焦显微镜：配备405nm/488nm/561nm三色激光器用于荧光标记观测
超高效液相色谱-质谱联用仪：配备HSST3色谱柱实现极性代谢物高效分离
全自动核酸提取工作站：整合磁珠法纯化与紫外分光定量模块
恒温恒湿培养箱：内置CO₂浓度调控模块满足特殊菌株培养需求
脉冲场电泳系统：通过交替电场分离大分子量染色体DNA
生物分子相互作用分析仪：基于表面等离子共振原理测定抗原抗体亲和常数

检测服务流程

确认测试对象及项目：根据要求确认测试对象并进行初步检查，安排样品寄送或上门采样;

制定与确认实验方案：制定实验方案并与委托方，确认验证方案的可行性和有效性;

签署委托书与支付：签署委托书，明确测试细节，确定测试费用并支付;

执行与监控实验测试：严格按照实验方案执行测试，记录数据，进行必要的控制和调整;

数据分析与出具报告：分析数据并进行归纳，撰写并审核测试报告，出具报告，并反馈结果给委托方。