NY/T 726-2003 饲料中杆菌肽锌的测定高效液相色谱法的部分内容

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中华人民共和国农业行业标准

NY/T 726—2003

饲料中杆菌肽锌的测定

高效液相色谱法

Determination of bacitracin zinc in feeds--Iigh performance liguid chromatography2003-12-01发布

中华人民共和国农业部

2004-C3-1实施

NY/T 726—2:: 3

本标推参考了AOAC65、1168（1982《预混料杆菌肽锌的测定方法》和有关国内外文轨，：台我国的实际情况制定的

本标准的附录A是规范性附录

本标准由中华人民共和国农业部提出本标准山全国饲料工业标准化技术委员会归本标准出国家饲料质量监督检验中心(北京)负责起节。本标崔十要起草人：高生，饶止华、范埋、李丽蓓、杨曙明。1范围

饲料中杆菌肽锌的测定

高效液相色谱法

本你准规定广以液相色谱议测定饲中料商肽铠的方法：标准适用于猪、鸡添加剂预泥料中杆菌然锌含母的测定2规范性引用文件

NY/T 726-2$c3

下列文作中的条款通过不标准的引用心战为个标准的条款。儿是注期的引文件，其随后所有约修改单：不也括批误的内容或修订版均个适用于么标准，然而.鼓前根据本标准达成协议的各方证究是否可使月这些文件的最新版本，凡是不注日期的引用文件，其最新版不适用于本标准（:B/T6E82分析实验空水规格研诚验方法Gt.F11699.1何料采样方法

3方法原理

添加剂预泌料中的杆菌然锌可用龄化的有机溶剂体系提取、离心，取上清液用于液相色增分槟。4试剂和材料

以下试剂滁特殊录明均为分析绝。水待个（/下二级月水的规定，4.1磷陵缺缓浓液：H5.心.称取1.59偿酸氢二例和x.5g磷酸二氢钾.溶解十11水中4.2磷胶盐EITA缓冲液：DI1.3.称取13.5磷酸一载钟和3.5%乙胶四乙酸一钠落解F「冰

4.3杆菌胀馆标准液：

4.3.1标准赠各液的配制：非确称最杆菌底锌标准品150.0mg.用提取落液济解，并定容19011...H济液菌然锌浓度为3001

4.3.2中叫激：吸取标准贮备液（41.3.1)10ml..用提取落液定容至0ml，该溶液杆菌肱锌的车2：300mg.i..

4.3.31作液：吸政中间液4.3.2)3.20nL、1.mml5.0ml用提取济液完容至20ml.液客终=服管的浓度分别为mg.1..3)mg1.sng/L.4.4溶剂系统：按表」配制。各泽剂标认的休积品妆符溶剂普乎100 ml.容常翔中.用小：-一等表1溶剂系纶表

清腔金113.1缓冲液

玻盘凝冲液

深磷龄

A游液

B浒烫

NY/T 726—2C03

俊器与设备

分析天平：感量 0.001 号;感量0.0001号，5.2超声波水浴

5.3离心机:4000 r/min

5.4高效液相色谱仪：亚有紫外检测器和2.5×150mmCm色谱样，6

样品的制备

根据B/T，499.1取H代表性的饲料样品，粉碎过C.45m孔径筛，充分混勾后装入磨口瓶中希，

7分析步骤

7.1提取

称取试样2.000)g，准确加人提取溶液10mL、充分摇动使试样与提妆溶液完个混合：置超声波水浴中超证提取15 in,其间不时用于摇动,取上层液丁离心机上4000 r/mit.离心5 min，直接取[:消用于高嫩液相色谱测定。

7.2测定

7.2.1液相色谱条件

a）色谱柱:2. 5x150 mm,1 μm Cm色谱。流动和：取溶剂系统表1A溶液：13溶液为1-59混合.用浓度为c(Na0H)=11mo1/1.氢氧化bh）

钠溶液调pH 为.8。

e）检测器：可调波长检测器，检测波长为254nm。d）进栏量：20l.。

7.2. 2定性定量方法

在上述条件下，以杆前肽锌二个主要活性成分（灿附录A）的峰保留时间，比较进行定性确认以个主要活性成分的峰面积加利值与相近浓度的杆菌肽锌标推浚的峰而积加和值比较近行定量计算。8分析结果的表述

以质品分数表示的试样杆菌肽锌的含量按式（1)计算：A..V

武中：

-以质量分数表示的战样中杆菌肽锌的含量，单位为毫克衔千克（mg/kg）；A试样中杆菌锌的加利峰侦；

A,-标准杆菌锌的加和蜂值;

m一标准杆菌肤锌的进样质量，单位为纳克(ng)：V—注人 HIFLC的体积,单位为微关(μL);n-称取试样的质量，单位为克（g）V

试样的定容休积，单位为毫升（ml.)，9允许差

两次平行检验结果的相对偏差小丁等丁10头。2

附录A

（规范性附录）

杆菌肽锌标准图谱

杆菌肽锌标准图谱

NY/T 728-23-3

NY/T726-2003

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饲料中杆菌肽锌的测定

高效液相色谱法

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