蛔虫卵死亡率PCR检测

检测项目

DNA提取效率检测：评估样本裂解效果，要求提取浓度≥5ng/μL，OD260/280比值1.8-2.0

引物特异性验证：检测蛔虫属特异性基因片段，扩增产物大小152bp±3bp

荧光探针灵敏度测试：SYBR Green检测限≤10拷贝/μL，线性范围10^1-10^7 copies

扩增曲线分析：监测FAM通道荧光信号，Ct值变异系数≤2.5%

熔解曲线峰值检测：Tm值标准范围83.5℃±0.5℃，单峰确认产物特异性

阳性对照品检测：含10^4拷贝/μL蛔虫卵DNA，Ct值允差±1.5循环

阴性对照检测：无模板对照(NTC)全程无扩增曲线

抑制物影响测试：添加0.5mg/mL腐殖酸，Ct值偏移≤1.0循环

重复性验证：同批次6复孔Ct值RSD≤3.0%

虫卵灭活率计算：基于ΔCt值换算死亡率，分辨率0.1%

环境基质干扰测试：土壤样本回收率≥85%

保存稳定性检测：-20℃储存样本30天DNA降解率≤10%

检测范围

污水处理厂污泥：监测污泥厌氧消化工艺对寄生虫卵灭活效果

有机肥料产品：评估粪肥高温发酵处理达标情况，蛔虫卵死亡率≥95%

土壤修复场地：检测重金属污染土壤修复后的生物安全指标

畜禽养殖粪便：集约化养殖场废弃物无害化处理验证

餐厨垃圾处理物：有机废弃物资源化利用前病原体控制检测

河道底泥样本：水域生态系统寄生虫污染风险评估

生物堆肥制品：验证符合农用有机肥料卫生标准

医疗废弃物处理残渣：高温蒸汽处理效果生物学评价

城市绿化用基质土：公共绿地土壤寄生虫污染筛查

生态厕所处理产物：无水厕所粪便处理物农用安全性检测

沼气工程沼渣：厌氧发酵副产物土地利用前检测

海水养殖沉积物：近海养殖区底质寄生虫污染监测

检测标准

GB 7959-2012 粪便无害化卫生要求：规定蛔虫卵死亡率检测方法

GB/T 36195-2018 畜禽粪便无害化处理技术规范：附录B寄生虫检测标准

CJ/T 309-2009 城市污水处理厂污泥处置标准：第5.3条虫卵控制指标

ISO 18744:2015 食品和动物饲料微生物学-寄生虫卵检测与计数

NY 525-2021 有机肥料标准：第4.3条蛔虫卵死亡率要求

EPA Method 1623.1 水媒寄生虫检测：分子检测方法参考标准

WHO Guidelines for the safe use of wastewater：Excreta and Greywater Vol.IV

GB/T 23472-2009 污泥处置农用泥质标准：寄生虫卵限值规定

ISO/TS 17919:2013 分子生物学方法检测食品病原体指南

HJ 833-2017 土壤和沉积物 硫化物的测定 分子生物学法

检测仪器

冷冻研磨仪：配备液氮冷冻槽，实现虫卵细胞壁低温破碎，粒径粉碎至≤0.5mm

磁珠法核酸提取仪：采用硅基磁珠吸附技术，单次处理96样本，DNA回收率≥90%

荧光定量PCR仪：配备多波长光学系统，支持TaqMan探针检测，温控精度±0.1℃

超微量分光光度计：检测波长范围190-840nm，样本需求0.5μL，A260/A280检测精度0.01

生物安全柜：Class II A2型，维持操作区洁净度ISO 5级，保障气溶胶控制

冷冻离心机：最大离心力25000×g，温控范围-20℃至40℃，确保低温核酸沉淀

梯度PCR仪：支持12阶温度梯度验证，升降温速率达5℃/秒

电泳成像系统：紫外透射波长312nm，分辨率500万像素，用于扩增产物确认

超纯水系统：产出18.2MΩ·cm无核酸酶水，TOC≤5ppb

恒温金属浴：控温范围室温-100℃，温度均匀性±0.3℃，用于酶反应温育

检测服务流程

确认测试对象及项目：根据要求确认测试对象并进行初步检查，安排样品寄送或上门采样;

制定与确认实验方案：制定实验方案并与委托方，确认验证方案的可行性和有效性;

签署委托书与支付：签署委托书，明确测试细节，确定测试费用并支付;

执行与监控实验测试：严格按照实验方案执行测试，记录数据，进行必要的控制和调整;

数据分析与出具报告：分析数据并进行归纳，撰写并审核测试报告，出具报告，并反馈结果给委托方。