食品安全国家标准 食品中胆固醇的测定

检测项目

本方法适用于食品中总胆固醇含量的定量测定，包括游离胆固醇和胆固醇酯的总量折算值。需同步测定样品中可能存在的干扰物质（如植物甾醇、维生素D等），通过保留时间比对与质谱特征离子确认实现特异性识别。对于强化食品或特殊膳食类产品，需额外验证添加型胆固醇衍生物的回收率。

检测范围

1.动物源性食品：包括肉类（畜肉/禽肉）、蛋类（全蛋/蛋黄）、乳制品（全脂乳/奶油/奶酪）、水产品（鱼/虾/贝类）及其加工制品

2.加工食品：烘焙制品（含黄油/奶油配方）、速冻调理食品（含动物油脂成分）、调味酱料（蛋黄酱/沙拉酱）

3.植物源性食品：需排除天然甾醇干扰的植物油基产品

4.特殊膳食：婴幼儿配方乳粉、医用营养补充剂等需进行基质效应校正的特殊样品

检测方法

前处理流程：

1.皂化反应：采用氢氧化钾乙醇溶液（浓度0.5mol/L）于80℃水浴振荡1小时

2.萃取纯化：正己烷三次液液萃取合并有机相

3.衍生化处理：硅烷化试剂BSTFA+TMCS（99:1）于70℃反应30分钟

4.过滤净化：0.22μm有机系针式滤膜过滤

色谱条件：

1.气相色谱法（GC-FID）：DB-5MS毛细管柱（30m0.25mm0.25μm），程序升温初始150℃保持2min→10℃/min升至280℃保持15min

2.高效液相色谱法（HPLC-ELSD）：C18色谱柱（250mm4.6mm,5μm），流动相乙腈-异丙醇（85:15），流速1.0mL/min

3.酶比色法：胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联反应体系，500nm波长测定吸光度

质控要求：

1.每批次样品需同步进行空白试验与加标回收试验

2.标准曲线相关系数R≥0.999

3.平行样相对偏差≤5%

4.检出限验证需满足SN/T1547-2011要求

检测仪器

核心设备配置：

1.气相色谱仪：配备FID检测器及自动进样系统，控温精度0.1℃

2.高效液相色谱仪：蒸发光散射检测器（ELSD），雾化气压力可调范围30-50psi

3.氮吹浓缩仪：多通道独立温控模块（室温-100℃）

4.超声波提取器：频率40kHz5%，功率连续可调

5.分析天平：万分之一精度（d=0.0001g）

辅助设备要求：

1.恒温水浴振荡器：温控范围室温-100℃，振荡频率0-300rpm

2.离心机：最大转速≥8000rpm

3.pH计：分辨率0.01pH单位

4.真空干燥箱：温度均匀性2℃

仪器校准规范：

1.GC系统需每日进行保留时间重复性测试（RSD≤0.5%）

2.HPLC泵流速误差每月核查（偏差≤3%）

3.ELSD检测器基线噪声每季度评估（≤5mV）

4.天平每日开机执行自校准程序

检测服务流程

确认测试对象及项目：根据要求确认测试对象并进行初步检查，安排样品寄送或上门采样;

制定与确认实验方案：制定实验方案并与委托方，确认验证方案的可行性和有效性;

签署委托书与支付：签署委托书，明确测试细节，确定测试费用并支付;

执行与监控实验测试：严格按照实验方案执行测试，记录数据，进行必要的控制和调整;

数据分析与出具报告：分析数据并进行归纳，撰写并审核测试报告，出具报告，并反馈结果给委托方。